王哲文 賀安祥 宋和鍵 張康林 藍 嵐 李友英 彭忠利*
(1.西南民族大學畜牧獸醫學院，青藏高原動物遺傳資源保護與利用教育部重點實驗室，動物科學國家民委重點實驗室，成都610041；
2.四川省甘孜藏族自治州畜牧科學研究所，康定626000)
牦牛是青藏高原特有的牛種，主要生長于海拔3 000～5 000 m的高原寒冷地區。牦牛為當地人民提供肉、奶和毛等生活必需品，具有極高的經濟價值，因此被稱為“雪域之舟”。隨著居民消費水平的不斷提高，牛肉的消費量不斷增加。牦牛肉風味獨特，具有綠色安全、氨基酸及無機礦物質含量高等特點[1]，但牦牛肉肌內脂肪含量較少、嫩度也低于相同年齡的黃牛和水牛[2]，這造成了消費者對牦牛口感較差的印象，不利于牦牛產業的發展。
研究表明，過瘤胃脂肪(ruman protect fat,RPF)對提高反芻動物乳品質和肉品質有著積極作用[3]。許鵬等[4]研究發現，在奶牛飼糧中添加RPF可有效提高奶牛產奶量及乳蛋白率。賴景濤[5]報道，給娟珊牛每日補飼300 g RPF，顯著提高了乳脂率和總固形物的含量。Lee等[6]研究表明，在羔羊飼糧中添加RPF后，其背最長肌中亞油酸的含量顯著提高。不過，目前關于RPF對牦牛肉品質的影響還未見報道。因此，本試驗旨在研究飼糧中添加不同水平的RPF對牦牛血清生化指標、內源激素、脂肪合成及代謝相關酶與肉品質的影響，以期為RPF在改善牦牛肉質上的應用提供技術支撐。
1.1 試驗時間和地點
本試驗于2021年7月至2021年10月在四川省甘孜州甘孜縣拖壩鄉康巴拉繁育養殖公司(北緯31°59′，東經100°05′)進行。該地區日照多，輻射強，年日照時數2 640 h，屬于高山寒溫帶氣候。
1.2 試驗設計
本試驗選取32頭平均體重[(181.55±23.59) kg]相近、健康無病、體況良好的4歲左右麥洼公牦牛。采用單因素隨機區組設計，將32頭牦牛分成4個組，每組8個重復，每個重復1頭牛。4個組分別為對照組(CON組，RPF添加水平為0)、試驗1組(RPF1組，RPF添加水平為1.2%)、試驗2組(RPF2組，RPF添加水平為2.4%)和試驗3組(RPF3組，RPF添加水平為3.6%)。預試期10 d，正試期100 d。
1.3 飼養管理
試驗牛進場前，對圈舍進行消毒殺菌，在試驗牛進圈舍前統一注射伊維菌素進行驅蟲。試驗期間每7 d清理1次圈舍并清掃水槽，確保牛舍清潔衛生。每天2次(08：00和16：30)飼喂，自由采食和飲水。
1.4 試驗飼糧
RPF以棕櫚油脂肪粉[實測成分為0.2%癸酸(C10∶0)、0.7%月桂酸(C12∶0)、1.5%肉豆蔻酸(C14∶0)、0.1%十五烷酸(C15∶0)、91.2%棕櫚酸(C16∶0)、5.8%硬脂酸(C18∶0)和0.5%其他]為來源。飼糧配制參考我國《肉牛飼養標準》(NY/T 815—2004)，按體重200 kg及平均日增重1 kg標準配制全混合日糧(TMR)，通過調整玉米和尿素配比保證粗蛋白質水平相同，試驗飼糧組成及營養水平見表1。
表1 試驗飼糧組成及營養水平(干物質基礎)
續表1項目 Items組別 GroupsCONRPF1RPF2RPF3中性洗滌纖維 NDF34.2734.6833.8432.97酸性洗滌纖維 ADF13.4713.2713.4713.66
1.5 測定指標及方法
1.5.1 血清指標測定
正試期最后1天對全部試驗牛進行尾根采血，靜置20 min后，3 000 r/min離心15 min，取血清待測。
血清生化指標：使用日立全自動生化分析儀(型號：3100)測定血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(CLB)、葡萄糖(GLU)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)和尿素氮(UN)含量以及谷丙轉氨酶(ALT)和谷草轉氨酶(AST)活性。
血清內源激素：血清胰島素(INS)、瘦素(LEP)、生長激素(GH)、胰島素樣生長因子-1(IGF-1)含量采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法測定，試劑盒購于上海酶聯生物科技有限公司。
血清脂肪合成及代謝相關酶：血清肉毒堿棕櫚酰轉移酶-1(CPT-1)、脂肪甘油三酯脂酶(ATGL)和乙酰輔酶A羧化酶(ACCase)活性采用ELISA法測定，試劑盒購于上海酶聯生物科技有限公司。
1.5.2 肉品質測定
每個組挑選4頭體重接近該組平均值的試驗牛，屠宰后采集第13～14肋骨間背最長肌，進行肉品質相關指標測定。
背最長肌理化指標：采用色差儀(型號：HP-200)測定屠宰后30 min的肉色；
蒸煮損失參照付洋洋[7]的方法測定；
水分含量采用GB/T 9695.15—2008烘箱恒重法測定；
粗脂肪含量采用GB 5009.6—2016測定；
粗灰分含量采用GB/T 9695.18—2008干灰分法測定；
粗蛋白質含量采用杜馬斯燃燒定氮法測定。
背最長肌脂肪酸組成采用GB/T 5009.168—2016歸一化法測定。
1.6 數據統計與分析
將試驗數據經Excel 2011進行初步整理后，采用SAS 9.4軟件對數據進行方差齊性和正態分布檢驗，若正態分布檢驗的P值小于0.05，采用對數變化進行數據轉化，之后再采用SAS 9.4軟件中的GLM程序進行單因素方差分析，P<0.05為差異顯著，在差異顯著的基礎上進行Duncan氏法多重比較，采用正交多項式(orthogonal polynomials)分析各指標隨RPF添加水平的線性和二次曲線反應趨勢，結果用平均值和均值標準誤(SEM)表示。
2.1 RPF對牦牛血清生化指標的影響
由表2可知，隨著RPF添加水平的提高，牦牛血清AST活性呈線性和二次曲線提高(P<0.05)，其中RPF2組血清AST活性顯著高于CON組、RPF1組和PRF3組(P<0.05)；
隨著RPF添加水平的提高，血清TG含量呈線性降低(P<0.05)，其中RPF3組血清TG含量顯著低于CON組和RPF1組(P<0.05)；
與CON組相比，飼糧添加不同水平RPF對血清TP、ALB、GLB、GLU、TC和UN含量以及ALT活性均無顯著影響(P>0.05)。
表2 RPF對牦牛血清生化指標的影響
2.2 RPF對牦牛血清內源激素的影響
由表3可知，RPF2組和RPF3組牦牛血清INS含量顯著高于CON組和RPF1組(P<0.05)；
各組血清LEP、GH和IGF-1含量差異均不顯著(P>0.05)。
表3 RPF對牦牛血清內源激素的影響
2.3 RPF對牦牛血清脂肪合成及代謝相關酶的影響
由表4可知，隨著RPF添加水平的提高，牦牛血清CPT-1活性呈線性提高(P<0.05)；
RPF1組和RPF3組血清ACCase活性顯著高于CON組(P<0.05)；
各組血清ATGL活性無顯著差異(P>0.05)。
表4 過瘤胃脂肪對牦牛血清脂肪合成及代謝相關酶的影響
2.4 RPF對牦牛肌肉理化指標的影響
由表5可知，隨著RPF添加水平的提高，牦牛背最長肌EE含量呈線性提高(P<0.05)；
與CON組相比，飼糧添加不同水平RPF對背最長肌肉色亮度值、肉色黃度值、肉色紅度值、蒸煮損失以及水分、粗灰分和粗蛋白質含量均無顯著影響(P>0.05)。
表5 RPF對牦牛肌肉理化指標的影響(鮮樣基礎)
2.5 RPF對牦牛肌肉脂肪酸組成的影響
由表6可知，與CON組相比，飼糧添加不同水平RPF對牦牛肌肉各單個脂肪酸、飽和脂肪酸(SFA)、不飽和脂肪酸(UFA)、單不飽和脂肪酸(MUFA)和多不飽和脂肪酸(PUFA)含量均無顯著影響(P>0.05)。
表6 RPF對牦牛肌肉脂肪酸組成的影響
續表6項目Items組別 GroupsCONRPF1RPF2RPF3均值標準誤 SEMP值 P-value過瘤胃脂肪 RPF線性Linear二次曲線Quadratic不飽和脂肪酸 UFA47.3952.3842.7441.574.300.3620.2020.501單不飽和脂肪酸 MUFA45.1448.1639.6937.904.100.5230.2170.611多不飽和脂肪酸 PUFA2.264.213.053.670.960.6250.5010.512
3.1 RPF對牦牛血清生化指標的影響
血清TP由GLB和ALB組成，其含量可在一定程度上反映動物營養水平及蛋白質代謝情況[8]。GLB是反映機體的免疫狀況的主要指標，ALB是營養物質運輸的重要載體，ALT可反映心肌細胞的健康狀況。本試驗條件下，各組牦牛血清TP、GLB、ALB含量及ALT活性均無顯著差異。肝臟是脂肪利用和合成的主要器官，AST是反映肝臟健康狀況的指標。研究表明，攝入富含脂肪的食物會加重肝臟的負擔，引起肝功能異常[9]。在本試驗中，隨著RPF添加水平的提高，牦牛血清AST活性呈線性和二次曲線上升，這說明RPF對牦牛的肝臟功能造成了不利影響。GLU可以反映機體的能量代謝[10]，本試驗中，飼糧添加RPF對血清GLU含量無顯著影響，這與許鵬等[4]在奶牛飼糧中添加RPF對血清GLU含量無顯著影響的結果一致。TC可以反映機體脂肪代謝。本試驗中，飼糧添加RPF對牦牛血清TC含量無顯著影響，這與吳樹峰[3]的研究結果相同。TG是機體脂肪代謝的指標。本試驗中，牦牛血清TG含量隨著RPF添加和水平的提高而降低，這可能與LEP合成增加有關。研究表明，LEP可以增加TG水解[11]，因此TG含量線性降低。UN是蛋白質分解代謝過程的主要產物，是反映飼糧蛋白質代謝的指標之一[12]。李蘭等[13]研究發現，在奶牛飼糧中添加RPF后，奶牛血清UN含量無顯著差異。本試驗添加RPF對牦牛血清UN含量也無顯著影響，這與李蘭等[13]的研究結果一致。
3.2 RPF對牦牛血清內源激素的影響
INS是促進合成代謝、維持血糖的一類重要激素，能促進脂肪的合成與儲存，并通過抑制脂肪酶的活性，從而減少脂肪的分解氧化。在本試驗中，RPF2組和RPF3組牦牛血清INS含量顯著高于CON組，這說明在牦牛飼糧中添加2.4%和3.6%的RPF可以促進牦牛脂肪合成。LEP是一種由機體脂肪組織所分泌的蛋白質激素，LEP通過作用于中樞神經的受體，來實現調控生物行為及新陳代謝的功能。研究表明，血清中LEP的含量與動物脂肪組織成正比[14]。Long等[15]研究發現，在母牛飼糧中添加RPF提高了血清LEP含量。本研究結果表明，飼糧添加RPF對牦牛血清LEP含量無顯著影響，但相比于CON組，RPF1組、RPF2組和RPF3組血清LEP含量分別提高了23.97%、17.98%和17.98%，這說明RPF一定程度上可以提高牦牛血清LEP含量。GH是腺垂體分泌調節動物生長發育的蛋白質激素，通過促進機體組織分裂增殖及蛋白質合成，從而增加細胞的體積和數量。本試驗中，各組牦牛血清GH含量無顯著差異，這與譚亞楠等[16]的研究結果一致。IGF-1是一種由肝臟分泌的激素，通過促進軟骨組織生長和骨化，使得骨骼增長。本試驗結果表明，飼糧添加RPF對牦牛血清IGF-1含量無顯著影響，說明RPF對牦牛生長無促進作用。
3.3 RPF對牦牛血清脂肪合成及代謝相關酶的影響
CPT-1是脂肪代謝中的一種關鍵限速酶。脂肪代謝過程中，脂酰輔酶A不能直接穿過線粒體內膜，必須由CPT-1催化脂酰輔酶A與肉堿結合成脂酰肉堿才能進入線粒體基質中。研究表明，脂肪酸可以誘導CPT-1基因表達，可能是通過過氧化物酶體增殖激活受體(PPAR)對CPT-1基因轉錄產生影響[17]。本試驗結果表明，隨著RPF添加水平的升高，血清CPT-1活性呈線性提高，可能是因為RPF促進了CPT-1的表達。ATGL是一種脂肪動員酶，它主要參與體內TG第1步水解反應[18]。本試驗中，相比于CON組，RPF1組、RPF2組和RPF3組牦牛血清ATGL活性分別提高了24.30%、20.98%和18.71%，這表明在飼糧中添加RPF對牦牛體脂的分解代謝有一定的增強作用。在脂肪酸合成代謝過程中，是以乙酰輔酶A為起始原料，通過ACCase在機體內將乙酰輔酶A羧化催化成丙二酰輔酶A，為脂肪酸合成提供底物[19-20]。本試驗中，飼糧添加RPF的試驗組牦牛血清ACCase活性均高于CON組，說明RPF可以提高牦牛脂肪合成水平，這與楊致玲等[21]的研究結果一致。
3.4 RPF對牦牛肉品質的影響
肉色是消費者最直觀對肉質的印象，肉色亮度越高，市場接受度越高[22]。蒸煮損失能反映肉的持水性能，是反映肉加工性能的重要指標。肉品中蛋白質的含量及組成能夠影響肉的風味。本試驗中，飼糧添加RPF對牦牛肌肉肉色、蒸煮損失以及水分、粗蛋白質和粗灰分含量均無顯著影響，這與吳樹峰[3]的研究結果一致。肌肉中脂肪含量越高，肉的風味、多汁性和嫩度就越好[23-24]。本試驗中，隨著飼糧中RPF添加水平的提高，牦牛肌肉中的粗脂肪含量呈線性提高，這可能與血清ACCase活性和INS含量提高有關，說明RPF可以促進粗脂肪在牦牛肌肉中的沉積。
人體無法合成PUFA，需要從食物中獲取。亞油酸(C18∶2n6c)是人體必需脂肪酸，具有預防膽固醇過高、動脈硬化的作用[25]。亞麻酸(C18∶3n3)也是人體必需脂肪酸，其可降低肝臟脂肪生成酶的活性，從而達到降脂的作用[26]。花生四烯酸(C20∶4n6)是人體一種半必需脂肪酸，是神經組織及腦組織的重要組成物質[27]。Lee等[6]在羔羊飼糧中添加RPF后，其背最長肌中亞油酸的含量顯著提高。本試驗中，飼糧添加RPF對牦牛肌肉亞油酸、UFA、MUFA和PUFA含量均無顯著影響，這可能與本試驗RPF產品的脂肪酸主要為SFA有關。
① 飼糧添加RPF能夠顯著提高牦牛血清ACCase活性和INS含量，有助于提高牦牛的肌內脂肪含量。
② 飼糧添加RPF會提高牦牛血清AST活性，對牦牛肝臟功能造成不利影響。
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