下面是小編為大家整理的核酸擴增檢測技術(NAT)血液篩查中重要性分析,供大家參考。

　核酸擴增檢測技術(NAT)在血液篩查中的重要性分析

　（廣元市中心血站

　628107）

　 摘要：

　目的: 分析對比核酸檢測與 ELISA（酶聯免疫吸附試驗）檢測結果，對血站開展核酸檢測在血液篩查的重要性進行探究。方法：以 2014 年 7 月到 2015 年 5 月我站采集的 16808 名獻血者血液標本為研究對象，利用 ELASE 法對血樣進行 HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、梅毒螺旋體 TP-抗體檢測，對無反應性及谷丙轉氨酶（ALT）合格標本進行核酸檢測(NAT)，并將 NAT 檢測有反應性標本送往中國輸血研究所和國家衛生和計劃生育委員會臨檢中心進行確認。結果：16808份樣本中 ELASE 法初檢和復檢均為陰性且 ALT 合格標本 16454 份，經核酸擴增檢測技術(NAT)檢出 HBV-DNA 陽性標本 27 份。將 27 份陽性血樣送往中國輸血研究所及國家衛生和計劃生育委員會檢測，其中溶血拒收 1 份。最終結果為 HBV DNA陽性 9 份，陽性率為 56.25%（9/16），包括隱匿性感染 8 份，窗口期 1 份。結論：核酸擴增檢測技術(NAT) 靈敏度較高，可彌補傳統的酶聯免疫吸附試驗 ELASE 法的缺陷，減少對窗口期病毒或變異病毒漏檢的可能，降低了臨床用血的風險，可以推廣應用于血站血液的篩查。

　 關鍵詞：無償獻血；ELASE；核酸擴增檢測技術(NAT)；血液篩查；

　 輸血廣泛應用于臨床，無論是外傷大出血、產后大出血、術中出血等血容量不足時需要血液供給，某些血液方面的疾病如血友病、鐮狀細胞性貧血、嚴重貧血、骨髓造血減弱或抑制、血小板減少癥等疾病都需要給予血液治療[1]。我國是乙肝大國，而艾滋病、丙肝、梅毒等傳染性疾病也在迅速發展[2]，由于血站采集血液通過多途徑獲得，且各人血液有所差異，因此血站血液篩查至關重要，尤其是 HBV、HCV、HIV、梅毒螺旋體、谷丙轉氨酶（ALT）的篩查，以避免輸血相關性疾病的發生。然而由于 HBV、HCV、HIV 病毒的窗口期、隱匿性感染以及病毒可能發生的變異，傳統的血清學篩查方式- ELASE 法，漏檢率較高，降低了臨床用血的安全性。核酸作為 HBV、HCV、HIV 病毒的遺傳物質，其在供血

　者機體針對病毒微生物產生特異性抗體并釋放到外周血之前就已存在，因此核酸檢測可大大提高 HBV、HCV、HIV 病毒的檢出率。鑒于此，為了提高臨床用血質量，降低輸血傳播疾病風險，本文根據我站開展核酸檢測后的情況，分析核酸擴增檢測技術(NAT)在血液篩查中的重要性。

　1 資料和方法 1.1 一般資料

　1.1.1 血樣來源

　從 2014 年 7 月到 2015 年 5 月我站 16808 名無償獻血者，年齡 19 至 55歲，平均年齡為（31.2±2.5）歲，通過健康咨詢，并按照國家衛生和計劃生育委員會《獻血者健康檢查標準》體檢合格，經乙肝表面抗原金標試紙條快速篩查 HBsAg 陰性，ALT 試紙條篩查 ALT<50U/L，硫酸銅比重法測量血紅蛋白，篩查結果均符合要求。

　1.1.2 血樣采集

　 所有獻血者肘靜脈取血采集血樣，分別放置于 2 支以乙二胺四乙酸抗凝的 5ml 真空采血管中，第 1 管不含分離膠，取血樣用于酶聯免疫檢測，第 2 管含分離膠，用于核酸擴增檢測，且核酸檢測管與采血后 4h 內 4℃低速離心，離心力 1600g，離心時間 20min，然后保存于 2~8 攝氏度冰箱中。

　 儀器與試劑

　 儀器：低溫離心機、Star 全自動加樣儀、FAME 全自動酶免檢測儀、羅氏 COBAS201AmpliPre 全自動核酸提取系統、CTM 核酸擴增檢測系統。

　 試劑：ELISA 檢測試劑：HBV 初檢(北京萬泰)、HCV 初檢(北京萬泰)HIV初檢(北京萬泰)HBV 復檢(法國伯樂)、HCV 復檢(索林)HIV 復檢(法國伯樂)核酸檢測試劑：羅氏配套 HBV、HCV、HIV 聯合檢測試劑（羅氏公司）

　1.3 檢測方法 1.3.1 酶聯免疫檢測

　 血液采集離心后，經 Star 全自動加樣儀加樣，于 FAME 自動酶免檢測儀檢測，項目包括 HBsAg、HCVAg/Ab、HIVAg/Ab,TP 抗體，且初檢和復檢檢測由不

　同的檢測人員采用兩種試劑完成。

　1.3.2 核酸擴增檢測

　 按標準操作規程進行試劑及耗材準備，經 ELASE 初檢復檢合格的標本，嚴格按照標準操作規程，離心 20min（離心力 1600g），于全自動核酸檢測系統逐步完成核酸提取、擴增與檢測。

　1.3.3 結果確認

　 對核酸擴增檢測陽性標本留取血漿，將血樣送往中國輸血研究所和國家衛生和計劃生育委員會臨檢中心進行確認。

　2.結果 2.1 ELASE 檢測結果

　 16808 份樣本中 ELASE 法初檢和復檢陽性 654 份，其中乙肝表面抗原（HBsAg）陽性 88 份，血清反應性比率為 0.52%（88/16808），HCV 抗體陽性 15份，血清反應性比率為 0.09%（15/16808）；HIV 抗體陽性 6 份，血清反應性比率為 0.03%（6/16808）梅毒螺旋體 TP-抗體陽性 215 份，血清反應性比率為 1.28%（215/16808）、谷丙轉氨酶（ALT）>40U/L330 份，血清反應性比率為 1.96%（330/16808），見表 1：

　2.3 ELASE 檢測與核酸擴增檢測技術(NAT)檢測對比

　 應用核酸擴增檢測技術（NAT）后 HBV 檢出率分為 0.684%較單獨 ELASE法 0524%的檢出率明顯提高，見表 4：

　3.討論

　 輸血是感染 HBV、HCV、HIV、TP 的主要途徑之一，輸血相關性疾病也越來越受到社會的廣泛關注，因此為降低經輸血傳播疾病風險，保證血液及血液制品的質量，國家對血液檢測的要求越來越嚴格。目前國內檢測 HBsAg、抗—HCV、抗—HIV 多采用第 3 代 ELASE 試劑，雖然該方法的靈敏度和特異性較高，但是依靠外周血中特異性抗原、抗體對 HBV、HCV、HIV 病毒進行檢測，需要避開其空

　窗期，而 HBV、HCV、HIV 病毒空窗期較長，一般為 45-46d、72d、22d，并且病毒存在變異的可能，易導致漏檢。核酸擴增檢測技術(NAT）是一種從核酸水平進行病毒篩查的手段，敏感性高, 可檢出標本中極微量的核酸,從而大大縮短 HBV、HCV、HIV 病毒檢測的“窗口期”。雖核酸擴增檢測技術（NAT）自上世紀 90 年代開始，已被歐美、日本等發達國家的輸血機構所普遍應用，但我國血站機構核酸檢測技術應用起步較晚[3]，對開展 NAT 檢測正處于摸索、熟悉、推廣階段。

　 本文通過對我站同時開展 ELISA 檢測和核酸檢測后的情況分析發現，16808份樣本中 ELASE 法初檢和復檢陽性標本654份，其中乙肝表面抗原（HBsAg）陽性 88 份，血清反應性比率為 0.52%，HCV 抗體陽性 15 份，血清反應性比率為0.09%（15/16808）；HIV 抗體 6 份，血清反應性比率為 0.04%（6/16808）,這表明ELASE 在血液篩查中具有很高的應用價值。ELASE 法初檢和復檢陽性均為陰性16154 份，經核酸擴增檢測技術(NAT)檢測出 36 份 HBV-DNA 陽性標本，檢出率0.223%(37/16154)，檢出率高于青海地區 0.068%[4]和常州地區 0.1%[5]，這可能是因為地區差異及我站使用的羅氏核酸檢測二代試劑靈敏度較一代試劑提高的原因。未檢出 HCV、HIV 核酸陽性標本，可能由于 HCV、HIV 感染率較低及其核酸物質為 RNA 對環境溫度等要求較高，穩定性較差，易降解[6]。36 份陽性血樣送往中國輸血研究所和國家衛生和計劃生育委員會臨檢中心檢測，最終結果為HBV DNA 陽性 27 份，確認陽性率為 72.97%（27/37）。應用 NAT 技術 HBV 檢出率為 0.684%，較 ELASE 的 0.524%，有顯著提高，提示 NAT 敏感性較高，能有效縮短出 ELISA 漏檢標本的窗口期，提高實驗室對處于窗口期、靜默感染等狀況標本的檢出率，說明核酸擴增檢測技術(NAT)在血液篩查應用及保證臨床輸血安全中的重要性。

　 綜上所述，核酸擴增檢測技術(NAT)在血液篩查中的的重要性不可小覷，對于提高血液的安全性有較高的應用價值，值得推廣應用。

　參考文獻:

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　 [5] 何亞琴，張建偉，楊愛龍，濮云峰，莊華. 核酸檢測技術在常州地區獻血篩查中的應用.

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